Sp9 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-436278

Panoramica

Sp9 (fattore di trascrizione Sp9) è un membro della famiglia Sp/KLF di proteine leganti la GC-box che regola programmi di espressione genica responsabili delle decisioni sul destino cellulare durante lo sviluppo embrionale. Nel topo, l’attività di Sp9 è stata collegata a processi di patterning e differenziamento nel sistema nervoso centrale e negli arti, dove coordina reti trascrizionali che influenzano la proliferazione dei progenitori e la morfogenesi dei tessuti. In quanto regolatore nucleare che si lega al DNA, Sp9 si integra in contesti di segnalazione più ampi dello sviluppo, inclusi percorsi che convergono sull’architettura di enhancer e promotori per modulare la trascrizione specifica di linea cellulare. Una funzione alterata dei fattori di trascrizione dello sviluppo è spesso associata a fenotipi congeniti e difetti del neurosviluppo, rendendo Sp9 un bersaglio utile per studi meccanicistici dei circuiti di regolazione genica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Sp9 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sp9 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sp9 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sp9 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Sp9.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sp9 per lo studio della segnalazione di Sp9, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sp9 critici per la funzione di Sp9
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sp9 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Sp9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Sp9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sp9. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Sp9 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Sp9 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sp9 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sp9 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.