Sp8 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401546-ACT

SP8 codifica o fator de transcrição Sp8 do tipo “zinc finger”, que se liga a elementos regulatórios ricos em GC para controlar programas de expressão gênica durante o desenvolvimento embrionário humano. Está implicado em processos de padronização e diferenciação, incluindo o desenvolvimento do neuroectoderma e craniofacial, ao coordenar redes transcricionais que interagem com sinais dirigidos por morfógenos, como WNT/β-catenina e vias de desenvolvimento relacionadas. Alterações na atividade de SP8 ou a desregulação de redes de genes-alvo têm sido associadas a fenótipos de malformações congênitas e a uma regulação aberrante de genes do desenvolvimento, tornando-o relevante para estudos de especificação de linhagens e morfogênese. Como regulador nuclear de ligação ao DNA, Sp8 é frequentemente usado como um nó para mapear circuitos transcricionais e o controle enhancer-promoter em sistemas em diferenciação.

Sp8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SP8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sp8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SP8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SP8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sp8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SP8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sp8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sp8 em células tumorais com expressão de SP8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.