SP140 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-409816-LAC

SP140 (umano) codifica un lettore della cromatina nucleare espresso prevalentemente nelle cellule immunitarie, dove contribuisce a interpretare i marcatori epigenetici per coordinare programmi trascrizionali specifici di linea. La proteina SP140 contiene domini associati al legame con la cromatina e alla regolazione trascrizionale, collegandola al controllo delle reti geniche infiammatorie e dello stato di differenziazione nei compartimenti mieloide e linfoide. Attraverso la modulazione dell’attività di enhancer e promotori, SP140 partecipa a vie che regolano la segnalazione delle citochine, l’attivazione dell’immunità innata e le risposte antimicrobiche. Studi genetici e di espressione hanno messo in relazione la disregolazione di SP140 con la suscettibilità a patologie immuno-mediate, rendendola un bersaglio utile per analizzare i meccanismi epigenetici che modellano i fenotipi infiammatori.

Le particelle di attivazione lentivirale SP140 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SP140 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SP140 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SP140, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SP140. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SP140 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.