SP140 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-436685-ACT

O gene Sp140 de camundongo codifica a SP140, um leitor nuclear de cromatina enriquecido em linhagens imunes que ajuda a moldar programas transcricionais durante respostas imunes inatas e adaptativas. A SP140 contém módulos epigenéticos “leitores” que interagem com histonas modificadas para influenciar a acessibilidade da cromatina, ligando-a a vias que controlam a sinalização de citocinas, a expressão de genes estimulados por interferon e a repressão/ativação de genes inflamatórios. Ao modular a transcrição em loci relevantes para a imunidade, a SP140 é usada para estudar a diferenciação de macrófagos e células B, respostas antimicrobianas e a regulação epigenética de redes inflamatórias. A atividade alterada de SP140 tem sido associada a uma homeostase imune desregulada e à biologia de doenças inflamatórias, tornando-a um nó útil para estudos mecanísticos de imunogenética e de controle gênico dirigido pela cromatina.

SP140 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Sp140 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SP140 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Sp140 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Sp140, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SP140. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Sp140 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SP140 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SP140 em células tumorais com expressão de Sp140 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.