SP140 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409816-ACT

SP140 codifica uma proteína nuclear de padrão pontilhado que contém domínios PHD e bromodomínios, atuando como leitora de cromatina e reguladora transcricional, com expressão enriquecida em linhagens imunes. Ela participa do controle epigenético de programas gênicos ligados às respostas imunes inata e adaptativa, influenciando vias como a sinalização de interferon e redes transcricionais inflamatórias. Por meio de interações com histonas modificadas e complexos associados à cromatina, a SP140 ajuda a moldar a expressão gênica específica de linhagem e estados de ativação celular. Estudos genéticos e de expressão associaram a desregulação de SP140 à suscetibilidade a doenças inflamatórias e mediadas pelo sistema imune, sustentando sua relevância para pesquisas mecanísticas em imunologia e biologia da cromatina.

SP140 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SP140 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SP140 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SP140 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SP140, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SP140. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SP140 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SP140 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SP140 em células tumorais com expressão de SP140 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.