SP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404996-ACT

O TFF2 humano (trefoil factor 2) codifica um peptídeo trefoil secretado que auxilia na proteção da mucosa gastrointestinal ao promover a restituição epitelial, a manutenção da barreira e a reparação após lesão. O TFF2 é induzido durante programas inflamatórios e de cicatrização e pode influenciar a comunicação cruzada entre epitélio e sistema imune por meio de vias ligadas à sinalização por citocinas, migração celular e remodelamento da matriz extracelular. Alterações na expressão de TFF2 foram relatadas em gastrite crônica e em estados metaplásicos, sendo frequentemente estudado no contexto da diferenciação do epitélio gástrico, do remodelamento associado à inflamação e da biologia tumoral. Essas propriedades tornam o TFF2 um alvo útil para dissecar o controle transcricional da defesa da mucosa e programas secretórios responsivos ao estresse em células humanas.

SP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TFF2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TFF2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TFF2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TFF2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SP em células tumorais com expressão de TFF2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.