Sos 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401135-ACT

O SOS1 humano codifica a proteína Sos1, um fator de troca de nucleotídeos de guanina (GEF) para Ras que conecta receptores tirosina-quinase ativados e proteínas adaptadoras como a GRB2 à ativação de RAS, promovendo a troca de GDP por GTP. Por meio dessa função, ele propaga o sinal para a cascata RAF–MEK–ERK (MAPK) e interage com saídas de sinalização relacionadas à PI3K que regulam proliferação, diferenciação, motilidade e dinâmica do citoesqueleto. A atividade de SOS1 é rigidamente controlada pelo recrutamento à membrana, pela ligação alostérica a RAS e pela fosforilação por feedback, tornando-o um nó-chave em redes responsivas a fatores de crescimento. A desregulação da sinalização SOS1/RAS-MAPK é relevante para a biologia da sinalização oncogênica e para distúrbios do desenvolvimento, sustentando estudos mecanísticos sobre remodelamento de vias, controle da amplitude do sinal e respostas transcricionais específicas do contexto.

Sos 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SOS1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sos 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SOS1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SOS1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sos 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SOS1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sos 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sos 1 em células tumorais com expressão de SOS1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.