Somatostatin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400280-ACT

O SST humano codifica a somatostatina, uma hormona peptídica amplamente expressa no sistema nervoso e em tecidos endócrinos, que suprime a secreção de hormona do crescimento, insulina, glucagon e várias hormonas gastrointestinais. A somatostatina sinaliza principalmente através de recetores de somatostatina acoplados à proteína G (SSTR1–SSTR5), envolvendo a inibição da adenilil ciclase mediada por Gi/o, a modulação de canais iónicos e a regulação a jusante das vias MAPK e PI3K para ajustar a excitabilidade, a secreção e a proliferação celular. Em contextos neuroendócrinos e pancreáticos, o SST contribui para o controlo parácrino da libertação de hormonas das ilhotas e para a sinalização neuroendócrina responsiva ao stress. A desregulação da sinalização da somatostatina é relevante para estudos de homeostase metabólica, diferenciação neuroendócrina e biologia de doenças dependentes de hormonas, incluindo modelos de disfunção das ilhotas pancreáticas e fenótipos de tumores neuroendócrinos.

Somatostatin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SST sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Somatostatin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SST em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SST, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Somatostatin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SST nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Somatostatin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Somatostatin em células tumorais com expressão de SST silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.