SOCS-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m2): sc-419666-ACT-2

O gene Socs3 de camundongo codifica o supressor da sinalização de citocinas 3 (SOCS-3), um regulador induzível de retroalimentação negativa que atenua a sinalização de citocinas e fatores de crescimento ao inibir a atividade da quinase JAK e ao promover, por meio de seu domínio SH2 e da SOCS box, a degradação de componentes da via de sinalização mediada por ubiquitina. O SOCS-3 modula as vias da família da IL-6 e do receptor de leptina para moldar programas transcricionais dependentes de STAT3 que controlam a inflamação, a diferenciação de células imunes e a homeostase metabólica. A atividade desregulada de SOCS-3 tem sido associada a estados inflamatórios crônicos, resistência à insulina e contextos de sinalização associados a tumores, por meio de alterações na responsividade a citocinas e na polarização de macrófagos. A edição do gene Socs3 em modelos murinos dá suporte a estudos mecanísticos da dinâmica dos circuitos JAK/STAT, da regulação transcricional induzida por citocinas e das contribuições específicas de tipo celular para fenótipos imunes e metabólicos.

SOCS-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Socs3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SOCS-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Socs3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Socs3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SOCS-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Socs3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SOCS-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SOCS-3 em células tumorais com expressão de Socs3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.