SOCS-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400455-ACT

SOCS3 codifica o supressor da sinalização de citocinas 3 (SOCS-3), um regulador de feedback negativo induzível por citocinas que restringe a sinalização JAK/STAT a jusante de receptores de citocinas da família da IL-6, de leptina e de interferons. O SOCS-3 liga-se a receptores fosforilados e a quinases JAK por meio do seu domínio SH2 e promove a degradação mediada por ubiquitina via o seu SOCS box, modulando assim a amplitude e a duração do sinal. Ao controlar programas transcricionais inflamatórios e metabólicos, o SOCS-3 influencia a ativação de células imunes, as respostas de fase aguda e a sensibilidade à insulina. A expressão desregulada de SOCS3 tem sido associada à inflamação crónica e à disfunção imunitária, sendo frequentemente estudada em contextos como a sinalização oncogénica de STAT, os mecanismos de doenças metabólicas e as respostas de citocinas induzidas por patógenos.

SOCS-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SOCS3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SOCS-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SOCS3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SOCS3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SOCS-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SOCS3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SOCS-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SOCS-3 em células tumorais com expressão de SOCS3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.