SOCS-1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400618-ACT

ヒトSOCS1はSOCS-1をコードしており、SOCS-1はサイトカイン受容体シグナル伝達を細胞内で負に制御する主要な因子である。SOCS-1は、SH2ドメインを介してリン酸化チロシンモチーフを認識し、さらにSOCSボックスを介したユビキチン‐プロテアソーム系への標的化によって、JAK/STAT経路の活性を抑制する。インターフェロンやインターロイキンなどの炎症性刺激の下流シグナルを減弱させることで、SOCS-1は免疫恒常性の維持に寄与し、抗原提示細胞の機能を調節するとともに、過剰な炎症性転写プログラムを抑え込む。SOCS1の発現または活性の異常は、免疫の異常活性化や、持続的なSTAT活性化が増殖・生存の変化に関与する腫瘍性シグナル伝達の状況と関連づけられている。これらの特性により、SOCS-1は免疫・がん生物学モデルにおいて、フィードバック阻害、サイトカイン応答性、転写適応を研究するための有用な結節点となる。

SOCS-1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SOCS1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SOCS-1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SOCS1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSOCS1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SOCS-1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSOCS1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSOCS-1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSOCS1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSOCS-1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。