SNX9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403578-ACT

A SNX9 humana (sorting nexin 9) é uma proteína adaptadora com domínio PX-BAR que conecta o reconhecimento de fosfoinositídeos à remodelação de membranas e à dinâmica da actina. Atua na endocitose mediada por clatrina ao coordenar componentes de AP-2/clatrina com a cisão de vesículas dependente de dinamina e ao acoplar os sítios endocíticos à polimerização de actina dirigida por Arp2/3 por meio de interações com N-WASP e fatores relacionados. Por essas funções, a SNX9 contribui para a internalização de receptores, o tráfego intracelular e a atenuação de sinais, influenciando vias como a do EGFR e outras redes de sinalização ligadas a RTKs. Alterações na expressão ou na função de SNX9 têm sido associadas a desregulação do tráfego vesicular e a estados de sinalização observados em contextos de câncer e de doenças neurobiológicas, tornando-a um nó útil para estudos mecanísticos da sinalização associada à endocitose.

SNX9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SNX9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SNX9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SNX9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SNX9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SNX9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SNX9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SNX9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SNX9 em células tumorais com expressão de SNX9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.