SNRK Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407320-ACT

A quinase relacionada à sucrose não fermentadora (SNRK) é uma quinase de serina/treonina da família de quinases relacionadas à AMPK que integra o estado energético celular a programas metabólicos e de adaptação ao estresse. A SNRK tem sido associada à regulação da função mitocondrial, do metabolismo de lipídios e glicose e da sinalização inflamatória, com funções descritas na biologia endotelial e cardíaca, bem como na homeostase do tecido adiposo. Por meio do controle dependente de fosforilação de efetores a jusante, a SNRK se conecta a vias que governam a detecção de nutrientes, as respostas ao estresse oxidativo e o remodelamento celular. Alterações na atividade ou na expressão de SNRK têm sido associadas a fenótipos cardiometabólicos e a mecanismos de doenças relacionadas à inflamação, tornando-a um alvo útil para investigar redes de sinalização reguladas pela energia em células humanas.

SNRK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SNRK sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SNRK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SNRK em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SNRK, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SNRK. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SNRK nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SNRK no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SNRK em células tumorais com expressão de SNRK silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.