SMG5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406989-ACT

SMG5 codifica um componente central conservado da maquinaria de degradação de mRNA mediada por nonsense (NMD), que preserva a integridade do transcriptoma ao promover o reconhecimento e a eliminação de mRNAs aberrantes. O SMG5 associa-se ao UPF1 fosforilado e atua em conjunto com SMG6 e SMG7 para coordenar a desfosforilação de UPF1 via PP2A e as etapas subsequentes de degradação, conectando a vigilância ao término da tradução e ao controle de qualidade de RNA. Por meio do NMD, o SMG5 influencia programas de expressão gênica, respostas ao estresse e a proteostase ao limitar o acúmulo de transcritos que contêm códons de parada prematuros e de certas isoformas fisiológicas de mRNA. A desregulação do NMD tem sido implicada em diversos contextos relevantes para doenças, incluindo o remodelamento do transcriptoma associado ao câncer e distúrbios genéticos causados por variantes nonsense, o que torna o SMG5 um nó útil para estudos mecanísticos em biologia de RNA.

SMG5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SMG5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SMG5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SMG5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SMG5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SMG5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SMG5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SMG5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SMG5 em células tumorais com expressão de SMG5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.