SMG1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404760-ACT

SMG1はPI3K関連セリン／スレオニンキナーゼをコードしており、UPF1をリン酸化して早期終止コドンを含む転写産物の監視を調整することで、ナンセンス介在mRNA分解（NMD）経路の中核因子として機能する。mRNAの安定性と翻訳を制御することを通じて、SMG1はプロテオスタシス、細胞ストレス応答、ゲノム恒常性の維持に寄与し、これらのプログラムはDNA損傷シグナル伝達や細胞周期制御とも交差する。SMG1依存的NMDの攪乱は、トランスクリプトームの品質管理を変化させ、分化状態やストレス適応的な遺伝子発現ネットワークに影響を与え得る。SMG1活性の異常は、複数の疾患状況で観察されるRNA監視およびシグナル伝達の表現型変化と関連づけられており、RNA代謝やストレス関連経路を研究するための機構的ノードとしての有用性を支持している。

SMG1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SMG1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SMG1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SMG1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSMG1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SMG1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSMG1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSMG1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSMG1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSMG1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。