Smad7 Double Nickase Plasmid (h): sc-400251-NIC

SMAD7 kodiert Smad7, ein inhibitorisches SMAD-Protein, das eine negative Rückkopplungskontrolle der TGF-β- und BMP-Signalübertragung ausübt, indem es die rezeptorvermittelte Phosphorylierung der rezeptorregulierten SMADs stört und den Rezeptorumsatz fördert. Durch die Modulation der SMAD-abhängigen Transkription beeinflusst Smad7 die epithelial-mesenchymale Transition, den Umbau der extrazellulären Matrix, Immun- und Entzündungssignale sowie die Zellzyklusregulation. Eine dysregulierte SMAD7-Aktivität wurde mit veränderten fibrotischen Reaktionen und inflammatorischen Phänotypen in Verbindung gebracht sowie – kontextabhängig – mit Rollen in der Tumorprogression über Effekte auf den Output des TGF-β-Signalwegs. Als Kontrollpunkt des Signalwegs wird SMAD7 häufig untersucht, um Signalstärke und -dynamik in kanonischen TGF-β/SMAD-Netzwerken und deren Crosstalk mit MAPK- und NF-κB-Signalwegen zu analysieren.

Smad7 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SMAD7-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SMAD7 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SMAD7-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SMAD7-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.