Smad7 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400251-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Smad7O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Smad7 (h) e o Plasmídeo Double Nickase Smad7 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para SMAD7. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Smad7 Anticorpo (B-8): sc-365846
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Smad7 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400251-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Smad7 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400251-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SMAD7 codifica a Smad7, um SMAD inibitório que fornece controlo de feedback negativo da sinalização de TGF-β e BMP ao interferir com a fosforilação, mediada por recetor, dos SMADs regulados por recetor e ao promover a renovação/degradação dos recetores. Ao modular a transcrição dependente de SMAD, a Smad7 influencia a transição epitélio–mesênquima, a remodelação da matriz extracelular, a sinalização imunitária e inflamatória e a regulação do ciclo celular. A atividade desregulada de SMAD7 tem sido associada a respostas fibróticas alteradas e a fenótipos inflamatórios, bem como a papéis dependentes do contexto na progressão tumoral, através de efeitos no output da via de TGF-β. Como ponto de controlo da via, o SMAD7 é frequentemente estudado para dissecar a amplitude e a temporalidade do sinal em redes canónicas de TGF-β/SMAD e o seu cross-talk com as vias MAPK e NF-κB.
Smad7 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus SMAD7 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de SMAD7. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função SMAD7. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com SMAD7 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.