Smad4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400110-ACT

SMAD4 codifica a Smad4, um co-mediador transcricional central da rede de sinalização TGF-β/BMP que forma complexos com SMADs reguladas por receptores para regular programas de expressão gênica dependentes do contexto. Por meio desses complexos, Smad4 controla processos que incluem regulação do ciclo celular, diferenciação, dinâmica epitélio–mesênquima e remodelamento da matriz extracelular. A perturbação da transcrição dependente de SMAD4 está ligada à desregulação do controle de crescimento e à alteração da homeostase tecidual, com inativação genética ou funcional frequente relatada em múltiplos tipos de tumor. O status de SMAD4 também é usado para estudar o crosstalk entre a sinalização de TGF-β e os programas MAPK, PI3K–AKT e Wnt, que em conjunto moldam os outputs transcricionais.

Smad4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SMAD4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Smad4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SMAD4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SMAD4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Smad4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SMAD4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Smad4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Smad4 em células tumorais com expressão de SMAD4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.