Sm D3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405302

Visão geral

SNRPD3 codifica a proteína central Sm D3, um componente conservado do anel Sm que se monta sobre snRNAs para formar pequenas ribonucleoproteínas nucleares do spliceossoma (snRNPs). A Sm D3 dá suporte à biogênese de snRNPs e à fidelidade do splicing de pré‑mRNA, ligando-a à dinâmica de montagem do spliceossoma e ao controlo de qualidade do processamento de RNA. A perturbação de proteínas do núcleo Sm pode alterar o uso de isoformas de transcritos e afetar programas de expressão génica que regulam a progressão do ciclo celular, respostas ao stress e diferenciação. Como o splicing aberrante é uma característica comum de muitos estados de doença, o SNRPD3 é frequentemente estudado como um nó que conecta a integridade do spliceossoma a fenótipos de maturação de RNA em todo o genoma em células humanas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Sm D3 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SNRPD3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SNRPD3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SNRPD3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Sm D3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SNRPD3 para a investigação da sinalização de Sm D3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SNRPD3 críticos para a função Sm D3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SNRPD3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Sm D3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Sm D3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SNRPD3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Sm D3 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Sm D3 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SNRPD3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SNRPD3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.