SLUG Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400389-ACT

O SNAI2 humano codifica o fator de transcrição de dedo de zinco SLUG, um regulador central da transição epitélio–mesênquima (EMT) que reprime programas de adesão epitelial enquanto promove características mesenquimais, motilidade e plasticidade do estado celular. O SLUG integra sinais de vias como TGF-β, WNT/β-catenina, NOTCH e tirosina-quinases de receptores para coordenar redes transcricionais que controlam diferenciação, migração e sobrevivência sob estresse. A atividade alterada de SNAI2 está associada a fenótipos de progressão tumoral, incluindo invasão e comportamento semelhante à metástase, e também tem sido relacionada à resistência a terapias e à manutenção de subpopulações com características de célula-tronco em múltiplos contextos de câncer. Além da oncologia, o SLUG contribui para processos de desenvolvimento e remodelamento tecidual, tornando-se um nó útil para estudar o controle transcricional de decisões de linhagem e transições celulares.

SLUG O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SNAI2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SLUG O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SNAI2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SNAI2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SLUG. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SNAI2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SLUG no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SLUG em células tumorais com expressão de SNAI2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.