Plásmido CRISPR de Activación (h) SLP-76: sc-401421-ACT

LCP2 codifica SLP-76, una proteína adaptadora citosólica esencial para acoplar la activación de inmunorreceptores con la señalización posterior en células hematopoyéticas. Tras la estimulación del receptor de células T o de receptores Fc, SLP-76 organiza complejos multiproteicos con LAT, VAV1, ITK y PLCγ para coordinar cascadas de fosforilación que regulan el flujo de calcio, la activación de MAPK, la remodelación del citoesqueleto y programas transcripcionales que gobiernan la activación y diferenciación de los linfocitos. A través de estas vías, SLP-76 influye en la adhesión mediada por integrinas, la formación de la sinapsis inmunológica y las respuestas efectoras, lo que la convierte en un nodo central para estudiar la dinámica de la señalización de los receptores de antígeno. La señalización proximal desregulada que involucra redes asociadas a SLP-76 es relevante para la disfunción inmunitaria y fenotipos inflamatorios, lo que respalda su uso en modelos mecanísticos de señalización de células inmunes.

SLP-76 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LCP2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SLP-76 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LCP2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LCP2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SLP-76. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LCP2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SLP-76 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SLP-76 en células tumorales con expresión de LCP2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.