SLM-2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-407141-ACT

ヒトKHDRBS3は、STARファミリーに属するRNA結合タンパク質SLM-2をコードしており、pre-mRNA中の特定の配列モチーフを認識することで、選択的スプライシングおよびRNAプロセシングを制御する。SLM-2は、組織や状況に依存した形で転写産物アイソフォームの選択に影響し、神経機能に関連するプログラムや、より広範な転写後遺伝子制御を形作る。スプライス部位選択とmRNA成熟を調節することで、KHDRBS3はシグナル伝達の出力やプロテオーム多様性に影響し得るため、RNA制御ネットワークや、複雑な疾患に広く見られるスプライシング異常の研究において重要である。SLM-2の発現変化やスプライシング因子のバランス異常は、転写とRNAプロセシングの共役機構や、疾患関連のアイソフォーム切り替えのメカニズム解明において検討されてきた。

SLM-2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KHDRBS3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SLM-2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KHDRBS3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKHDRBS3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SLM-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKHDRBS3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSLM-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKHDRBS3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSLM-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。