SLK CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406490-ACT

ヒトSLK（STE20-like kinase）は、細胞骨格のリモデリング、フォーカルアドヒージョンのターンオーバー、および細胞の運動性・極性の制御に関与するとされるセリン／スレオニンキナーゼをコードします。SLKは、MAPK様キナーゼカスケードやストレス応答性経路に結びついたシグナル伝達ネットワークに関与し、アクチン動態を細胞周期の進行やアポトーシスと協調させる役割を担います。接着依存性シグナル伝達や組織構築への影響を介して、SLK活性の変化は、腫瘍細胞の浸潤、上皮の完全性、発生異常に関連する表現型と関連づけられてきました。そのためSLKは、機械的刺激（メカニカルキュー）を転写プログラムに結びつける、遊走・形態形成・シグナル間クロストークのモデル系において、しばしば研究対象となります。

SLK CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLKの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SLK CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLK 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLK転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SLKの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLK遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSLK依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLK発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSLK経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。