Slit2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423021-ACT

O gene Slit2 de camundongo codifica uma molécula sinalizadora secretada de orientação, mais conhecida por se ligar aos receptores Robo para regular o direcionamento de axônios, a migração neuronal e a repulsão na linha média durante o desenvolvimento. Para além do sistema nervoso, a sinalização SLIT2–ROBO modula a dinâmica do citoesqueleto, a adesão celular e a motilidade direcional por meio de GTPases da família Rho e de vias a jusante de remodelamento da actina. A atividade de Slit2 tem sido implicada no padrão de vascularização e no tráfego de células imunes, ligando-a a processos como a angiogênese e o remodelamento tecidual. A desregulação da sinalização SLIT2/ROBO tem sido associada a alterações de invasão e comportamento metastático em modelos de câncer e a fenótipos neurodesenvolvimentais aberrantes, sustentando sua relevância em estudos mecanísticos de orientação e migração.

Slit2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Slit2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Slit2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Slit2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Slit2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Slit2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Slit2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Slit2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Slit2 em células tumorais com expressão de Slit2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.