SLC7A10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405035-ACT

SLC7A10 (também conhecido como Asc-1) codifica um transportador de aminoácidos neutros independente de sódio na membrana plasmática, que medeia a troca de pequenos aminoácidos, incluindo glicina, L-serina, alanina e treonina. Ao regular a disponibilidade intracelular de aminoácidos, o SLC7A10 contribui para o metabolismo celular e o equilíbrio redox por meio da homeostase de aminoácidos, podendo influenciar processos relacionados a neurotransmissores em tecidos excitáveis nos quais o manejo de glicina e serina é crítico. Alterações na expressão ou na atividade de SLC7A10 têm sido associadas a perturbações em programas metabólicos e redes de sinalização ligadas ao crescimento celular e às respostas ao estresse. Essas características tornam o SLC7A10 um alvo relevante para estudos mecanísticos de transporte de aminoácidos, reprogramação metabólica e interação entre vias em modelos celulares relevantes para doenças.

SLC7A10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC7A10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SLC7A10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC7A10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC7A10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SLC7A10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC7A10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SLC7A10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SLC7A10 em células tumorais com expressão de SLC7A10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.