Plásmido CRISPR de Activación (h) SLC43A1: sc-417236-ACT

SLC43A1 codifica un transportador de aminoácidos neutros grandes independiente del sodio (LAT3) que facilita la captación celular de aminoácidos de cadena ramificada y otros aminoácidos esenciales, apoyando la detección de nutrientes y el metabolismo anabólico. Al modular la disponibilidad intracelular de aminoácidos, SLC43A1 influye en la señalización vinculada a mTORC1, la síntesis de proteínas y la adaptación metabólica en estados celulares proliferativos y diferenciados. Se ha informado de una expresión alterada de SLC43A1 en contextos de reprogramación metabólica y adquisición de nutrientes asociada a tumores, donde la actividad del transportador puede moldear el crecimiento y las respuestas al estrés. Estas características hacen de SLC43A1 un nodo útil para estudiar la dinámica del transporte de aminoácidos, la interconexión entre vías metabólicas y el control transcripcional de las redes de transportadores de nutrientes.

SLC43A1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC43A1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SLC43A1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC43A1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC43A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SLC43A1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC43A1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SLC43A1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SLC43A1 en células tumorales con expresión de SLC43A1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.