SLAM Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404289-ACT

SLAMF1 codifica a molécula de ativação linfocítica de sinalização (SLAM, CD150), um recetor da superfamília das imunoglobulinas expresso em múltiplas linhagens hematopoiéticas, que medeia interações homotípicas célula–célula. Após o seu engajamento, o SLAM associa-se a proteínas adaptadoras como SAP/SH2D1A e EAT-2 para modular a sinalização de quinases da família SRC, moldando a ativação de linfócitos, a produção de citocinas e as respostas do centro germinativo. Este recetor integra-se na organização da sinapse imunitária e em programas de sinalização associados a NF-κB/MAPK que influenciam a diferenciação efectora e a função citotóxica. A desregulação da sinalização de SLAMF1 tem sido implicada em disfunção imunitária e na fisiopatologia inflamatória, sustentando o seu uso como alvo em estudos mecanísticos de regulação imunitária.

SLAM O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLAMF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SLAM O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLAMF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLAMF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SLAM. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLAMF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SLAM no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SLAM em células tumorais com expressão de SLAMF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.