SKIV2L2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-411757-ACT

SKIV2L2（MTR4とも呼ばれる）は、保存性の高いSF2ファミリーのRNAヘリカーゼをコードしており、核内RNAエクソソームの中核的な補助因子として機能する。ATP依存的にリボ核タンパク質複合体（RNP複合体）のリモデリングを促進し、RNAの監視（サーベイランス）と分解・代謝回転を可能にする。rRNA、snoRNA、snRNA、および複数クラスの非コードRNAのプロセシングと品質管理に不可欠で、核小体の恒常性維持やリボソーム生合成も支える。TRAMP様複合体などのアダプター複合体との相互作用を介して、SKIV2L2は異常または不要な転写産物をエクソソーム依存的な分解経路へと誘導する。SKIV2L2に関連するRNA代謝の制御異常は、遺伝子発現プログラムの変化や細胞ストレス表現型と関連づけられており、がん生物学やRNAプロセシング異常疾患の研究でしばしば取り上げられる。

SKIV2L2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SKIV2L2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SKIV2L2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SKIV2L2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSKIV2L2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SKIV2L2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSKIV2L2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSKIV2L2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSKIV2L2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSKIV2L2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。