Six2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402975

概要

SIX2 は、ホームオボックス型転写因子である Six2 をコードしており、系譜コミットメントや上皮―間葉シグナル伝達プログラムを制御することで、前駆細胞のアイデンティティと器官形成を調節します。ヒトの発生において Six2 は、ネフロン前駆細胞の維持と、他の腎発生制御因子と協調した転写ネットワークの調整因子として最もよく知られており、分化のタイミングや組織パターニングに影響を与えます。SIX2 の発現異常や Six2 活性の変化は、先天異常や腫瘍に伴う転写リプログラミングに関与することが示唆されており、発生経路が乗っ取られて異常な増殖や浸潤性を支える状況がみられます。核内の DNA 結合タンパク質としての Six2 は、遺伝子制御回路、クロマチン状態ダイナミクス、発生シグナル間クロストークを研究するための機構的な切り口を提供します。

Six2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSIX2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SIX2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SIX2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Six2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Six2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SIX2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Six2の機能に不可欠なSIX2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SIX2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Six2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSix2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SIX2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Six2 HDRプラスミド（h）および Six2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSIX2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSIX2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。