SIRT3 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-425704-LAC

O gene Sirt3 de camundongo codifica a desacetilase mitocondrial dependente de NAD+ SIRT3, um regulador central do estado de acetilação de proteínas na matriz mitocondrial. A SIRT3 modula a fosforilação oxidativa, a β-oxidação de ácidos graxos, o metabolismo de corpos cetônicos e as defesas antioxidantes ao desacetilar enzimas como a SOD2 e componentes da cadeia de transporte de elétrons, influenciando assim a produção de ATP e a homeostase de espécies reativas de oxigênio. Por meio de conexões com a sinalização AMPK–PGC-1α, a biogênese mitocondrial e respostas ao estresse, a SIRT3 é amplamente estudada na adaptação metabólica e na disfunção mitocondrial relacionada ao envelhecimento. Alterações na atividade da SIRT3 e a hiperacetilação de proteínas mitocondriais têm sido associadas à neurodegeneração, ao estresse cardiometabólico e à biologia tumoral em sistemas pré-clínicos, sustentando seu uso como um nó mecanístico em vias relevantes para doenças mitocondriais.

As Partículas de Ativação Lentivirais SIRT3 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Sirt3 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais SIRT3 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Sirt3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de SIRT3. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Sirt3 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.