Plásmido CRISPR de Activación (h) SIRT1: sc-400085-ACT

El SIRT1 humano codifica una desacetilasa de histonas de clase III dependiente de NAD+ que modula la accesibilidad de la cromatina y los programas de transcripción al desacetilar sustratos histónicos y no histónicos, incluidos p53, los factores FOXO, NF-κB y PGC-1α. A través de estas dianas, SIRT1 integra la detección de nutrientes con las respuestas al estrés, la biogénesis mitocondrial, la autofagia y las vías de reparación del daño en el ADN. La actividad de SIRT1 influye en la homeostasis metabólica, la inflamación y la senescencia celular, vinculando su desregulación con la biología de las enfermedades cardiometabólicas, mecanismos asociados a la neurodegeneración y la reprogramación transcripcional relevante para tumores. Como nodo central epigenético y de señalización, SIRT1 se investiga con frecuencia en modelos de estrés oxidativo, fenotipos relacionados con el envejecimiento y activación inmunitaria.

SIRT1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SIRT1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SIRT1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SIRT1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SIRT1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SIRT1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SIRT1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SIRT1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SIRT1 en células tumorales con expresión de SIRT1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.