SIRT1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400085-ACT

O SIRT1 humano codifica uma histona desacetilase de classe III dependente de NAD+ que modula a acessibilidade da cromatina e programas transcricionais ao desacetilar substratos histônicos e não histônicos, incluindo p53, fatores FOXO, NF-κB e PGC-1α. Por meio desses alvos, o SIRT1 integra a detecção de nutrientes com respostas ao estresse, biogênese mitocondrial, autofagia e vias de reparo de danos ao DNA. A atividade do SIRT1 influencia a homeostase metabólica, a inflamação e a senescência celular, relacionando sua desregulação à biologia de doenças cardiometabólicas, a mecanismos associados à neurodegeneração e à reprogramação transcricional relevante para tumores. Como um nó central epigenético e de sinalização, o SIRT1 é frequentemente investigado em modelos de estresse oxidativo, fenótipos relacionados ao envelhecimento e ativação imune.

SIRT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SIRT1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SIRT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SIRT1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SIRT1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SIRT1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SIRT1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SIRT1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SIRT1 em células tumorais com expressão de SIRT1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.