SIRP-γ Double Nickaseプラスミド (h): sc-404902-NIC

SIRPGは、シグナル調節タンパク質ガンマ（SIRP-γ）をコードしており、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する受容体です。SIRP-γは主にヒトT細胞およびその他の白血球サブセットに発現しています。CD47との結合を介して、SIRP-γは細胞間認識や免疫シナプスの形成に関与し、白血球の接着、遊走、活性化プログラムに影響を与えます。この軸は、組織浸潤や炎症応答を形作る細胞骨格リモデリングや、免疫チェックポイント様のシグナル伝達を制御する経路とも交差します。CD47–SIRPファミリー相互作用の異常やSIRPG発現パターンの変化は、腫瘍における免疫回避、自己免疫に関連する免疫バランスの破綻、移植に関連する免疫反応性などの文脈と関連づけられており、機構免疫学研究における重要性を裏付けています。

SIRP-γ ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SIRPG 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SIRPG内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SIRPGの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SIRPGが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。