SIMP Double Nickaseプラスミド (h): sc-404481-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- SIMP Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- SIMPダブルニカースプラスミド（h）およびSIMPダブルニカースプラスミド（h2）は、STT3Bを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
SIMP Double Nickaseプラスミド (h) | sc-404481-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SIMP Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-404481-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
STT3Bは、小胞体におけるN結合型糖鎖付加（N型糖鎖付加）を担うオリゴ糖転移酵素（oligosaccharyltransferase：OST）複合体の触媒サブユニットをコードしており、翻訳共役的な糖鎖転移を逃れた糖タンパク質に対する翻訳後修飾において重要な役割を果たします。タンパク質の折りたたみ、品質管理、ならびに小胞体関連分解（ERAD）への寄与を通じて、STT3Bは分泌経路のプロテオスタシスや、膜受容体・分泌受容体の成熟に影響を与えます。STT3B依存的な糖鎖付加が撹乱されると、受容体の輸送やシグナル出力が変化し得ることから、この経路は細胞ストレス応答や、糖タンパク質恒常性の異常に関わる疾患、さらには腫瘍生物学に関連する表現型と結び付けられています。小胞体における糖タンパク質プロセシングのハブとして、STT3Bは分泌経路の制御、免疫受容体の生合成、プロテオスタシス・ネットワークの再構築に関する研究で頻繁に解析対象となっています。
SIMP ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における STT3B 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、STT3B内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、STT3Bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、STT3Bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。