SIK1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401769-ACT

A quinase 1 induzível por sal (SIK1) é uma quinase de serina/treonina da família de quinases relacionadas à AMPK que transduz sinais dependentes de cAMP/PKA para regular programas transcricionais que controlam o metabolismo, a sinalização circadiana e respostas ao estresse. A SIK1 modula a atividade de CREB/CRTC e contribui para o controle, dependente de fosforilação, de coativadores de transcrição, conectando estímulos extracelulares a alterações na expressão gênica em múltiplos tipos celulares. Por essas vias, a SIK1 influencia a homeostase energética celular, a diferenciação e respostas adaptativas a estímulos ambientais. A desregulação da sinalização de SIK1 tem sido associada a alterações na regulação metabólica e a controle transcricional aberrante em contextos relevantes para doenças, apoiando seu uso em estudos mecanísticos do acoplamento entre sinalização e transcrição.

SIK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SIK1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SIK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SIK1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SIK1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SIK1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SIK1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SIK1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SIK1 em células tumorais com expressão de SIK1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.