Siglec-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402497-ACT

SIGLEC1 codifica a Siglec-1 (CD169), uma lectina do tipo imunoglobulina que se liga ao ácido siálico, expressa seletivamente em macrófagos e em populações específicas de células dendríticas, e que medeia o reconhecimento e a captura de glicoconjugados sialilados em células do hospedeiro e em patógenos. Por meio do seu papel na adesão, endocitose e processamento/apresentação de antígenos, a Siglec-1 contribui para a detecção imune inata, as interações célula–célula e a modulação de respostas inflamatórias nos microambientes teciduais. Ela é comumente associada a programas de ativação induzidos por interferon tipo I e a estados de polarização de macrófagos, o que a torna um marcador útil e um nó funcional importante na biologia imune mieloide. A expressão desregulada de SIGLEC1 tem sido associada a condições inflamatórias crônicas e autoimunes, processos de doenças infecciosas e fenótipos de macrófagos associados a tumores, reforçando sua relevância para a imunologia e para a pesquisa de mecanismos de doença.

Siglec-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SIGLEC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Siglec-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SIGLEC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SIGLEC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Siglec-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SIGLEC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Siglec-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Siglec-1 em células tumorais com expressão de SIGLEC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.