SH-PTP2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400260-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- SH-PTP2 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- SH-PTP2ダブルニカースプラスミド（h）およびSH-PTP2ダブルニカースプラスミド（h2）は、PTPN11を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: SH-PTP2 抗体 (B-1): sc-7384
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
SH-PTP2 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400260-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SH-PTP2 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400260-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PTPN11は、細胞質型のタンパク質チロシンホスファターゼであるSH-PTP2（SHP2）をコードしており、活性化された受容体型チロシンキナーゼやサイトカイン受容体からのシグナルを、下流のRAS–MAPK/ERK経路およびPI3K–AKT経路へと中継する。SHP2は、SH2ドメインと触媒性PTPドメインを介して、リン酸化依存的なタンパク質間相互作用を調節し、増殖、分化、遊走、生存を制御する。PTPN11の機能は、JAK/STATシグナル伝達のダイナミクスや、増殖因子シグナルネットワークにおけるフィードバック制御とも関連している。PTPN11活性の破綻や変異は、発達症候群や多様ながん性シグナル伝達の文脈と関連づけられており、経路のリワイヤリングやシグナル伝達研究において広く解析されている重要な結節点である。
SH-PTP2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PTPN11 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PTPN11内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PTPN11の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PTPN11が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。