Plásmido CRISPR de Activación (h) SerpinB1: sc-402083-ACT

SERPINB1 codifica el inhibidor intracelular de serinproteasas SerpinB1, una serpin del clado B que frena proteasas derivadas de neutrófilos como la elastasa, la catepsina G y la proteinasa 3 para limitar el daño proteolítico durante la inflamación. Al modular la actividad de las proteasas, SerpinB1 influye en la supervivencia de los leucocitos, las respuestas antimicrobianas y los programas de remodelación tisular que se solapan con la señalización inmunitaria innata y las vías de estrés inflamatorio. La expresión o actividad desregulada de SERPINB1 se ha asociado con una homeostasis inflamatoria alterada y con daño impulsado por proteasas en afecciones que afectan a tejidos mucosos y pulmonares, así como en contextos más amplios de enfermedades mediadas por el sistema inmunitario. Estas características hacen de SERPINB1 un nodo útil para estudiar el equilibrio proteasa–antiproteasa, la biología de los neutrófilos y la remodelación asociada a la inflamación.

SerpinB1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SERPINB1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SerpinB1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SERPINB1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SERPINB1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SerpinB1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SERPINB1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SerpinB1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SerpinB1 en células tumorales con expresión de SERPINB1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.