CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
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SEMA6D Double Nickaseプラスミド (m): sc-431980-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- SEMA6D Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- SEMA6Dダブルニカースプラスミド（m）およびSEMA6Dダブルニカースプラスミド（m2）は、Sema6dを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: SEMA6D 抗体 (A-8): sc-393258
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
SEMA6D Double Nickaseプラスミド (m) | sc-431980-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SEMA6D Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-431980-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Sema6d は、マウスのセマフォリン SEMA6D（膜貫通型のガイダンス因子）をコードしており、プレキシン受容体を介してシグナルを伝達し、接触依存的な細胞間コミュニケーションを制御する。SEMA6D は、細胞骨格の再編成、方向性移動、軸索誘導を調節し、セマフォリン–プレキシンシグナルを Rho ファミリー GTPase 活性および下流のアクチンダイナミクスと結び付ける。神経パターニングに加えて、SEMA6D は組織形態形成や、ガイダンス経路が細胞の配置を規定する血管・免疫関連プロセスにも関与する。Sema6d 発現の変化を含むセマフォリンシグナルの破綻は、疾患関連モデルにおいて、異常な神経支配、炎症細胞のトラフィッキング、微小環境リモデリングの機序を解析するために利用される。
SEMA6D ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Sema6d 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Sema6d内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Sema6dの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Sema6dが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。