Plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA4F (m): sc-422884

Présentation

Sema4f code la sémaphorine murine SEMA4F, un signal de guidage transmembranaire qui contribue à coordonner la communication cellule–cellule et l’organisation spatiale des tissus. SEMA4F active la signalisation plexine/neuropiline afin de moduler la dynamique du cytosquelette, la croissance des neurites, le guidage axonal et le remodelage associé aux synapses, via des voies qui convergent vers les GTPases de la famille Rho et la régulation de l’actine en aval. Outre le développement et la plasticité du système nerveux, la signalisation des sémaphorines participe au positionnement des cellules immunitaires et à leurs comportements migratoires dans divers microenvironnements. Des dérégulations des réseaux sémaphorine–plexine ont été impliquées dans des phénotypes neurodéveloppementaux et neuro-inflammatoires, faisant de Sema4f un nœud utile pour disséquer les programmes de guidage et de motilité dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA4F (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sema4f dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sema4f, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sema4f à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SEMA4F.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sema4f pour l'étude de la signalisation de SEMA4F, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sema4f essentiels à la fonction de SEMA4F
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sema4f pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SEMA4F plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SEMA4F plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sema4f. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SEMA4F plasmide HDR (m) et le SEMA4F (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sema4f pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sema4f définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.