SELH CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-415276

概要

SELENOHは、セレン含有タンパク質H（SELH）をコードしています。SELHは核に多く存在する小型のレドックス活性タンパク質で、セレン依存的な触媒活性を介して細胞の抗酸化防御とレドックス恒常性の維持に寄与します。SELHは、活性酸素種（ROS）の緩衝調節、ゲノム安定性、ならびに細胞の生存や分化に影響を及ぼすストレス応答性の転写プログラムの制御と関連しています。セレンタンパク質の生物学というより広い枠組みの中で、SELHはグルタチオン系およびチオレドキシン系に関連するレドックスネットワークと交差し、ミトコンドリアおよび小胞体のストレス応答を調節し得ます。SELENOHの発現変動やセレンの取り扱い（代謝・利用）の異常は、神経変性、代謝機能障害、がんに伴う酸化ストレス表現型といった文脈で検討されており、その機構解明のためにヒト細胞モデルを用いた研究が動機づけられています。

SELH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSELENOH遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SELENOH内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SELENOHのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SELHタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SELHシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SELENOH欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SELHの機能に不可欠なSELENOHエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SELENOHゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SELH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSELH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SELENOH遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SELH HDRプラスミド（h）および SELH HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSELENOHホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSELENOH標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。