Selenoprotein S Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404444-ACT

SELENOS codifica a Selenoproteína S, uma selenoproteína de membrana do retículo endoplasmático que auxilia a degradação associada ao RE (ERAD) e a proteostase ao promover a remoção de proteínas mal dobradas. Por meio da modulação da sinalização de estresse do RE e da homeostase redox, a Selenoproteína S influencia as vias da resposta a proteínas mal dobradas (unfolded protein response, UPR) e os desfechos de sinalização inflamatória. Variações na expressão de SELENOS têm sido associadas a alterações na produção de citocinas e na suscetibilidade a fenótipos metabólicos e relacionados ao sistema imune, refletindo seu papel na interface entre estresse oxidativo e inflamação. Como um gene humano envolvido no controle de qualidade do RE, SELENOS é frequentemente estudado em contextos de adaptação ao estresse crônico, ativação de macrófagos e respostas celulares a insultos proteotóxicos.

Selenoprotein S O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SELENOS sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Selenoprotein S O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SELENOS em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SELENOS, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Selenoprotein S. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SELENOS nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Selenoprotein S no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Selenoprotein S em células tumorais com expressão de SELENOS silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.