Sec61α2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402223-ACT

SEC61A2 codifica a subunidade humana Sec61α2, um componente central do translocão Sec61 que medeia a importação cotraducional de polipeptídeos nascentes para o retículo endoplasmático e dá suporte à inserção de proteínas de membrana. Ao acoplar o ancoramento do ribossomo à translocação para o RE, a Sec61α2 contribui para o fluxo da via secretória, para a proteostase do RE e para a coordenação com a degradação associada ao RE e com a sinalização da resposta a proteínas mal dobradas durante estresse proteotóxico. Alterações na função do complexo Sec61 podem influenciar a maturação de proteínas, o controle de qualidade e a adaptação celular ao estresse, processos frequentemente implicados na biologia de doenças proliferativas e metabólicas. Assim, SEC61A2 é relevante para estudar a regulação da capacidade de translocação no RE, a remodelação do secretoma e as vias de resposta ao estresse a jusante.

Sec61α2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SEC61A2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sec61α2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SEC61A2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SEC61A2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sec61α2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SEC61A2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sec61α2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sec61α2 em células tumorais com expressão de SEC61A2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.