Sec61α1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-424716

概要

Sec61a1は、分泌タンパク質および膜タンパク質の共翻訳的／翻訳後の小胞体（ER）内への取り込みを担う、ER膜上Sec61トランスロコンの孔形成コアサブユニットであるSec61α1をコードする。Sec61α1は、リボソームのドッキングとペプチドの膜透過・膜への組み込みを結び付けることで、タンパク質生合成、ERの品質管理、ならびにプロテオスタシス経路（小胞体ストレス応答（UPR）シグナル伝達や小胞体関連分解（ERAD）など）を支える。SEC61チャネル機能の破綇は、分泌経路ホメオスタシスや細胞ストレス応答の異常と関連づけられており、これらの過程は炎症、代謝機能障害、神経変性のモデルでしばしば関与が示されている。マウス系では、Sec61a1は、ERへの取り込み能がプロテオトキシックストレス下でのシグナル伝達、分化、生存をどのように規定するかを解析するための扱いやすい切り口を提供する。

Sec61α1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSec61a1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sec61a1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sec61a1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Sec61α1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Sec61α1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sec61a1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Sec61α1の機能に不可欠なSec61a1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sec61a1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Sec61α1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSec61α1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sec61a1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Sec61α1 HDRプラスミド（m）および Sec61α1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSec61a1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSec61a1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。