Sec6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405053-ACT

O EXOC3 humano codifica a Sec6, uma subunidade essencial do complexo de ancoragem exocisto, que coordena o direcionamento e o acoplamento de vesículas secretórias em domínios específicos da membrana plasmática. A Sec6 sustenta a exocitose polarizada, o tráfego de membranas e a coordenação do citoesqueleto, influenciando processos como migração celular, crescimento de neuritos e polaridade epitelial. Por meio de seu papel na ancoragem de vesículas, a função de EXOC3 se cruza com vias que regulam a reciclagem de receptores e a secreção regulada, moldando os desfechos de sinalização. A desregulação do tráfego mediado pelo exocisto tem sido associada a alterações de polaridade celular e a fenótipos invasivos, tornando o EXOC3 um ponto de partida útil para estudar mecanismos dependentes de secreção em modelos relevantes para doenças.

Sec6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EXOC3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sec6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EXOC3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EXOC3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sec6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EXOC3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sec6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sec6 em células tumorais com expressão de EXOC3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.