SEC13 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-431017

Visão geral

Sec13 codifica a SEC13, um componente central do complexo de revestimento COPII, que promove a seleção de cargas e o brotamento de vesículas a partir de sítios de saída do retículo endoplasmático, sustentando o tráfego do RE para o Golgi. Além de sua função na via secretória, a SEC13 participa da arquitetura do complexo do poro nuclear e contribui para a regulação da homeostase celular por meio do controle, dependente do tráfego de membranas, da localização e da degradação de proteínas. A interrupção do transporte dependente de SEC13 pode perturbar a proteostase, a sinalização de estresse e a coordenação do ciclo celular, tornando a Sec13 um ponto útil para estudar vias que interligam secreção, dinâmica de membranas e troca núcleo-citoplasmática. Em sistemas murinos, modelos de perda de função de Sec13 são relevantes para investigar como processos de tráfego e associados ao poro influenciam o desenvolvimento e fenótipos celulares ligados a doenças.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO SEC13 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Sec13 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Sec13, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Sec13 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína SEC13.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Sec13 para a investigação da sinalização de SEC13, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Sec13 críticos para a função SEC13
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Sec13 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo SEC13 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo SEC13 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Sec13. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo SEC13 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR SEC13 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Sec13 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Sec13 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.