SDHD CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h2): sc-403276-KO-2

概要

コハク酸デヒドロゲナーゼ複合体サブユニットD（SDHD）は、ミトコンドリア複合体IIにおける膜アンカーとして必須の構成要素であり、トリカルボン酸（TCA）回路でのコハク酸酸化を、酸化的リン酸化（OXPHOS）経路のユビキノン・プールへの電子伝達に結び付けます。コハク酸からフマル酸への変換および呼吸鎖フラックスを支えることで、SDHDはミトコンドリアのレドックスバランス、ATP産生、ならびに活性酸素種（ROS）恒常性の維持に寄与します。SDHD機能の攪乱は、コハク酸依存的な低酸素応答経路の制御や、より広範なミトコンドリア・ストレス応答を含む代謝シグナル伝達を変化させます。SDHDの制御異常は、神経内分泌系および傍神経節系の系統に影響する遺伝性・散発性の腫瘍素因症候群に関与しており、ミトコンドリア代謝と疾患関連シグナルの機序研究に有用な標的となります。

SDHD CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）は、human細胞株におけるSDHD遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SDHD内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SDHDのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SDHDタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SDHDシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SDHD欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SDHDの機能に不可欠なSDHDエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SDHDゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SDHD CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSDHD CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SDHD遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SDHD HDRプラスミド（h）および SDHD HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSDHDホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSDHD標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。