SCML2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405003-NIC

SCML2（sex comb on midleg-like 2）はポリコーム群（Polycomb group）のタンパク質で、クロマチンへの結合と転写抑制プログラムの協調を通じて、エピジェネティックな遺伝子制御に寄与します。ヒト細胞ではSCML2は雄性生殖系列で高発現しており、減数分裂関連遺伝子の発現制御や性染色体に関連したクロマチンダイナミクスなど、精子形成を支えるクロマチン状態の確立に関与すると考えられています。ポリコーム関連経路やヒストン修飾の状態を調節することで、SCML2は発生に関わる遺伝子ネットワークや細胞運命・細胞同一性の決定に影響を与えます。SCML2の機能や発現の異常は生殖細胞の発生不全と関連して報告されており、がんにみられるエピジェネティック制御の破綻に伴う転写プログラムの観点からも検討されています。

SCML2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SCML2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SCML2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SCML2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SCML2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。