SASH1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403567

Panoramica

SASH1 (SAM and SH3 domain containing 1) codifica una proteina adattatrice/di scaffolding che integra la segnalazione tramite i moduli di interazione SAM e SH3 per coordinare l’organizzazione del citoscheletro, l’adesione cellulare e il comportamento migratorio. È stata associata alla regolazione di MAPK/ERK e di altre vie guidate da chinasi che influenzano l’integrità epiteliale, le risposte allo stress e le decisioni sul destino cellulare. Alterazioni dell’espressione o della funzione di SASH1 sono state riportate in molteplici tipi di tumore e il gene è spesso studiato nel contesto dell’invasione, di fenotipi associati alla metastasi e di reti di segnalazione di tipo oncosoppressore. SASH1 è inoltre di interesse nella biologia vascolare e infiammatoria, dove la segnalazione mediata da adattatori può influenzare la funzione endoteliale e le proprietà di barriera.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SASH1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SASH1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SASH1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SASH1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SASH1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SASH1 per lo studio della segnalazione di SASH1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SASH1 critici per la funzione di SASH1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SASH1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SASH1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SASH1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SASH1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SASH1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SASH1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SASH1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SASH1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.