SART-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407069

Visão geral

DSE codifica a epimerase do sulfato de dermatano, uma enzima residente no RE/Golgi que converte ácido D‑glucurônico em ácido L‑idurônico nas cadeias de condroitina/sulfato de dermatano, moldando assim a estrutura dos proteoglicanos e as propriedades da matriz extracelular (MEC). Ao modular a composição de glicosaminoglicanos, a DSE influencia a fibrilogênese do colágeno, a adesão célula–matriz e a disponibilidade de fatores de crescimento, o que pode afetar programas de sinalização como o TGF‑β e outras vias responsivas à MEC. Alterações na biossíntese de sulfato de dermatano têm sido associadas a fenótipos de tecido conjuntivo e a remodelamento estromal desregulado, e a perturbação de DSE é estudada em contextos como fibrose e biologia do microambiente tumoral. O gene também é citado em parte da literatura sob o nome da proteína SART‑2, que pode aparecer em estudos de antígeno e de expressão dependendo das convenções de anotação.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO SART-2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene DSE em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do DSE, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do DSE na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína SART-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de DSE para a investigação da sinalização de SART-2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) DSE críticos para a função SART-2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos DSE para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo SART-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo SART-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus DSE. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo SART-2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR SART-2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia DSE para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo DSE definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.