Sar1a CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422799

概要

Sar1aは、小型GTPアーゼであるSAR1Aをコードしており、ER出口部位におけるCOPII被覆小胞形成を開始する必須因子として、ERからゴルジ体への輸送を駆動します。SAR1AはGDP結合型とGTP結合型の間をサイクルすることで膜の曲率形成を促し、SEC23/SEC24およびSEC13/SEC31複合体をリクルートして、分泌経路のフラックスとプロテオスタシスを維持します。Sar1a依存的な輸送は、脂質・リポタンパク質の取り扱い、細胞外マトリックスの分泌、細胞表面受容体の輸送に影響し、シグナル伝達や分化プログラムの広範な制御と結び付いています。COPII介在輸送およびER恒常性の破綻は、発生・代謝表現型に関連するストレス応答や病態に関与するとされており、Sar1aは分泌依存的な生物学の機構研究に有用な結節点となります。

Sar1a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSar1a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sar1a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sar1aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Sar1aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Sar1aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sar1a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Sar1aの機能に不可欠なSar1aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sar1aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Sar1a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSar1a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sar1a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Sar1a HDRプラスミド（m）および Sar1a HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSar1aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSar1a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。