SAP-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403868-ACT

ELK4 codifica o fator de transcrição humano com domínio ETS SAP-1, um efetor nuclear da sinalização ativada por mitógenos que interage com o fator de resposta ao soro (SRF) em elementos de resposta ao soro para regular programas de genes de resposta imediata. O SAP-1 é ativado a jusante das cascatas ERK/MAPK e ajuda a acoplar sinais extracelulares de fatores de crescimento a saídas transcricionais que controlam proliferação, diferenciação e expressão gênica responsiva ao estresse. Como parte da família de fatores do complexo ternário, o SAP-1 influencia a dinâmica transcricional associada à cromatina e contribui para a regulação dependente do contexto de vias do ciclo celular e de sobrevivência. A atividade desregulada de ELK4/SAP-1 tem sido implicada em redes de sinalização oncogênica e em estados transcricionais aberrantes relevantes para a biologia tumoral e outros distúrbios proliferativos.

SAP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ELK4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SAP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ELK4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ELK4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SAP-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ELK4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SAP-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SAP-1 em células tumorais com expressão de ELK4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.